GB5009.5-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測定內(nèi)容是什么?百檢網(wǎng)檢測范圍廣泛，可根據(jù)客戶需求選擇合適的檢測標(biāo)準(zhǔn)及項(xiàng)目安排檢測，全國近千家合作實(shí)驗(yàn)室，CMA/CNAS資質(zhì)齊全，可就近安排寄樣檢測。今天百檢網(wǎng)就給大家簡單介紹一下GB5009.5-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測定標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容。

1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中蛋白質(zhì)的測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)*法和第二法適用于各種食品中蛋白質(zhì)的測定,第三法適用于蛋白質(zhì)含量在10g/100g以上的糧食、豆類奶粉、米粉、蛋白質(zhì)粉等固體試樣的測定。

本標(biāo)準(zhǔn)不適用于添加無機(jī)含氮物質(zhì)、有機(jī)非蛋白質(zhì)含氮物質(zhì)的食品的測定。

*法 凱氏定氮法

2.原理

食品中的蛋白質(zhì)在催化加熱條件下被分解,產(chǎn)生的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。堿化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收后以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定,根據(jù)酸的消耗量計(jì)算氮含量,再乘以換算系數(shù),即為蛋白質(zhì)的含量。

3.試劑和材料

3.1 試劑

除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的三級水。

3.1.1 硫酸銅(CuSO4·5H2O)。

3.1.2 硫酸鉀(K2SO4)。

3.1.3 硫酸(H2SO4)。

3.1.4 硼酸(H3BO3)。

3.1.5 甲基紅指示劑(C15H15N3O2)。

3.1.6 溴甲酚綠指示劑(C21H14Br4O5S)。

3.1.7 亞甲基藍(lán)指示劑(C16H18ClN3S·3H2O)。

3.1.8 氫氧化鈉(NaOH)。

3.1.9 95%乙醇(C2H5OH)。

3.2 試劑配制

3.2.1 硼酸溶液(20g/L):稱取20g硼酸,加水溶解后并稀釋至1000mL。

3.2.2 氫氧化鈉溶液(400g/L):稱取40g氫氧化鈉加水溶解后,放冷,并稀釋至100mL。

3.2.3 硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(?H2SO4)]0.0500mol/L或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(HCl)]0.0500molL。

3.2.4 甲基紅乙醇溶液(1g/L):稱取0.1g甲基紅,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀釋至100mL。

3.2.5 亞甲基藍(lán)乙醇溶液(1g/L):稱取0.1g亞甲基藍(lán),溶于95%乙醇,用95%乙醇稀釋至100mL。

3.2.6 溴甲酚綠乙醇溶液(1g/L):稱取0.1g溴甲酚綠,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀釋至100mL。

3.2.7 A混合指示液:2份甲基紅乙醇溶液與1份亞甲基藍(lán)乙醇溶液臨用時(shí)混合。

3.2.8 B混合指示液:1份甲基紅乙醇溶液與5份溴甲酚綠乙醇溶液臨用時(shí)混合。

4.儀器和設(shè)備

4.1 天平:感量為1mg。

4.2 定氮蒸餾裝置:如圖1所示。

4.3 自動(dòng)凱氏定氮儀。

5.分析步驟

5.1 凱氏定氮法

5.1.1 試樣處理:稱取充分混勻的固體試樣0.2g～2g、半固體試樣2g～5g或液體試樣10g～25g(約當(dāng)于30mg～40mg氮),*至0.001g,移入干燥的100mL、250mL或500mL定氮瓶中,加入0.4g硫酸銅、6g硫酸鉀及20mL硫酸,輕搖后于瓶口放一小漏斗,將瓶以45℃角斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上。小心加熱,待內(nèi)容物全部碳化,泡沫完全停止后,加強(qiáng)火力,并保持瓶內(nèi)液體微沸,至液體呈藍(lán)綠色并澄清透明后,再繼續(xù)加熱0.5h～1h。取下放冷,小心加入20mL水,放冷后,移入100mL容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混勻備用。同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。

5.1.2 測定:按圖1裝好定氮蒸餾裝置,向水蒸氣發(fā)生器內(nèi)裝水至2/3處,加入數(shù)粒玻璃珠,加甲基紅乙醇溶液數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸,以保持水呈酸性,加熱煮沸水蒸氣發(fā)生器內(nèi)的水并保持沸騰。

5.1.3 向接受瓶內(nèi)加入10.0mL硼酸溶液及1滴～2滴A混合指示劑或B混合指示劑,并使冷凝管的下端插入液面下,根據(jù)試樣中氮含量,準(zhǔn)確吸取2.0mL～10.0mL試樣處理液由小玻杯注入反應(yīng)室,以l0mL水洗滌小玻杯并使之流入反應(yīng)室內(nèi),隨后塞緊棒狀玻塞。將10.0mL氫氧化鈉溶液倒入小玻杯,提起玻塞使其緩緩流入反應(yīng)室,立即將玻塞蓋緊,并水封。夾緊螺旋夾,開始蒸餾。蒸餾10mi后移動(dòng)蒸餾液接收瓶,液面離開冷凝管下端,再蒸餾1min。然后用少量水沖洗冷凝管下端外部,取下蒸餾液接收瓶。盡快以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至終點(diǎn),如用A混合指示液,終點(diǎn)顏色為灰藍(lán)色;如用B混合指示液,終點(diǎn)顏色為淺灰紅色。同時(shí)做試劑空白。

5.2 自動(dòng)凱氏定氮儀法

稱取充分混勻的固體試樣0.2g～2g、半固體試樣2g～5g或液體試樣10g～25g(約當(dāng)于30mg～40mg氮),*至0.001g,至消化管中,再加入0.4g硫酸銅、6g硫酸鉀及20mL硫酸于消化爐進(jìn)行消化。當(dāng)消化爐溫度達(dá)到420℃之后,繼續(xù)消化1h,此時(shí)消化管中的液體呈綠色透明狀,取出冷卻后加入50mL水,于自動(dòng)凱氏定氮儀(使用前加入氫氧化鈉溶液,鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液以及含有混合指示劑A或B的硼酸溶液)上實(shí)現(xiàn)自動(dòng)加液、蒸餾、滴定和記錄滴定數(shù)據(jù)的過程。

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