GB4789.12-2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗內容是什么?百檢網檢測范圍廣泛，可根據客戶需求選擇合適的檢測標準及項目安排檢測，全國近千家合作實驗室，CMA/CNAS資質齊全，可就近安排寄樣檢測。今天百檢網就給大家簡單介紹一下GB4789.12-2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗標準內容。

1.范圍

本標準規定了食品中肉毒梭菌( Clostridium botulinum)及肉毒毒素( botulinum toxin)的檢驗方法。

本標準適用于食品中肉毒梭菌及肉毒毒素的檢驗。

2.設備和材料

除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下：

2.1 冰箱:2℃～5℃、-20℃。

2.2 天平:感量0.1g。

2.3 無菌手術剪、鑷子、試劑勺。

2.4 均質器或無菌乳缽。

2.5 離心機:3000r/min、14000r/min。

2.6 厭氧培養裝置。

2.7 恒溫培養箱:35℃±1℃、28℃±1℃。

2.8 恒溫水浴箱:37℃±1℃、60℃±1℃、80℃±1℃。

2.9 顯微鏡:10倍～100倍。

2.10 PCR儀。

2.11 電泳儀或毛細管電泳儀。

2.12 凝膠成像系統或紫外檢測儀。

2.13 核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計。

2.14 可調微量移液器:0.2μL～2μL、2μL～20μL、20μL～200μL、100μL～1000μL。

2.15 無菌吸管:1.0mL、10.0mL、25.0mL。

2.16 無菌錐形瓶:100mL。

2.17 培養皿:直徑90mm。

2.18 離心管:50mL、1.5mL。

2.19 PCR反應管。

2.20 無菌注射器:1.0mL。

2.21 小鼠:15g～20g,每一批次試驗應使用同一品系的KM或ICR小鼠。

3.培養基和試劑

除另有規定外,PCR試驗所用試劑為分析純或符合生化試劑標準,水應符合GB/T 6682中一級水的要求。

3.1 庖肉培養基:見A.1。

3.2 胰蛋白酶胰蛋白胨葡萄糖酵母膏肉湯( TPGYT):見A.2。

3.3 卵黃瓊脂培養基:見A.3。

3.4 明膠磷酸鹽緩沖液:見A.4。

3.5 革蘭氏染色液:見A.5。

3.6 10%胰蛋白酶溶液:見A.6。

3.7 磷酸鹽緩沖液(PBS):見A.7。

3.8 1mol/L氫氧化鈉溶液。

3.9 1mol/L鹽酸溶液。

3.10 肉毒毒素診斷血清。

3.11 無水乙醇和95%乙醇。

3.12 10mg/mL溶菌酶溶液。

3.13 10mg/mL蛋白酶K溶液。

3.14 3mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)。

3.15 TE緩沖液

3.16 引物:根據表1中序列合成,臨用時用超純水配制引物濃度為10μmol/L。

3.1710×PCR緩沖液

31825mmol/ L MgCl2。

3.19 dNTPs:dATP、dTTP、dCTP、dGTP。

3.20 Taq酶。

3.21 瓊脂糖:電泳級。

3.22 溴化乙錠或 Goldview。

3.23 5×TBE緩沖液。

3.24 6×加樣緩沖液。

3.25 DNA分子量標準。

4.檢驗程序

肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗程序見圖1。

5.操作步驟

5.1 樣品制備

5.1.1 樣品保存

待檢樣品應放置2℃～5℃冰箱冷藏。

5.1.2 固態與半固態食品

固體或游離液體很少的半固態食品,以無菌操作稱取樣品25g,放入無菌均質袋或無菌乳缽,塊狀食品以無菌操作切碎,含水量較髙的固態食品加入25mL明膠磷酸鹽緩沖液,乳粉、牛肉干等含水量低的食品加入50mL明膠磷酸鹽緩沖液，浸泡30min，用拍擊式均質器拍打2min或用無菌研杵研磨制備樣品勻液，收集備用。

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