GB4789.8-2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗內容是什么?百檢網檢測范圍廣泛，可根據客戶需求選擇合適的檢測標準及項目安排檢測，全國近千家合作實驗室，CMA/CNAS資質齊全，可就近安排寄樣檢測。今天百檢網就給大家簡單介紹一下GB4789.8-2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗標準內容。

1.范圍

本標準規(guī)定了食品中小腸結腸炎耶爾森氏菌( Yersinia enterocolitica)的檢驗方法。

本標準適用于食品中小腸結腸炎耶爾森氏菌的檢驗。

2.設備和材料

除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設備外,其他設備和材料如下：

2.1 冰箱:0℃～4℃

2.2 恒溫培養(yǎng)箱:26℃±1℃、36℃±1℃。

2.3 顯微鏡:10倍～100倍。

2.4 均質器。

2.5 天平:感量0.1g。

2.6 滅菌試管:16mm×160mm、15mm×100mm。

2.7 滅菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)。

2.8 錐形瓶:200mL、500mL

2.9 滅菌平皿:直徑90mm。

2.10 微生物生化鑒定試劑盒或微生物生化鑒定系統(tǒng)。

3.培養(yǎng)基和試劑

3.1 改良磷酸鹽緩沖液:見A.1。

3.2 CIN-1培養(yǎng)基( Cepulodin Irgasan Novobiocin Agar):見A.2。

3.3 改良Y培養(yǎng)基( Agar Y, Modified):見A.3。

3.4 改良克氏雙糖培養(yǎng)基:見A.4。

3.5 糖發(fā)酵管:見A.5。

3.6 鳥氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基:見A.6。

3.7 半固體瓊脂:見A.7。

3.8 緩沖葡萄糖蛋白胨水[甲基紅(MR)和VP試驗用]:見A.8。

3.9 堿處理液:見A.9。

3.10 尿素培養(yǎng)基:見A.10。

3.11 營養(yǎng)瓊脂:見A.11。

3.12 小腸結腸炎耶爾森氏菌診斷血清。

4.檢驗程序

小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗程序見圖1

5.操作步驟

5.1 增菌

以無菌操作取25g(或25mL)樣品放人含有225mL改良磷酸鹽緩沖液增菌液的無菌均質杯或均質袋內,以8000r/min均質lmin或拍擊式均質器均質1min。液體樣品或粉末狀樣品,應振蕩混勻均質后于26℃±1℃增菌48h～η2h。增菌時間長短可根據對樣品污染程度的估計來確定。

5.2 堿處理

除乳與乳制品外,其他食品的增菌液0.5mL與堿處理液4.5mL充分混合15s。

5.3 分離

將乳與乳制品增菌液或經過堿處理的其他食品増菌液分別接種于CIN-Ⅰ瓊脂平板和改良Y瓊脂平板,26℃士1℃培養(yǎng)48h±2h。典型菌落在CIN-1上為深紅色中心,周圍具有無色透明圈(紅色牛眼狀菌落),菌落大小為Ⅰmm～2mm,在改良Y瓊脂平板上為無色透明、不黏稠的菌落。

5.4 改良克氏雙糖試驗

分別挑取5.3中的可疑菌落3個～5個,分別接種于改良克氏雙糖鐵瓊脂,接種時先在斜面劃線,再于底層穿刺,26℃±1℃培養(yǎng)24h,將斜面和底部皆變黃且不產氣的培養(yǎng)物做進一步的生化鑒定。

5.5 尿素酶試驗和動力觀察

用接種環(huán)挑取一滿環(huán)5.4得到的可疑培養(yǎng)物,接種到尿素培養(yǎng)基中,接種量應足夠大,振搖幾秒鐘,26℃士1℃培養(yǎng)2h～4h。將尿素酶試驗陽性菌落分別接種于兩管半固體培養(yǎng)基中,于26℃±1℃和36℃士1℃培養(yǎng)24h。將在26℃有動力而36℃無動力的可疑菌培養(yǎng)物劃線接種營養(yǎng)瓊脂平板,進行純化培養(yǎng),用純化物進行革蘭氏染色鏡檢和生化試驗。

5.6 革蘭氏染色鏡檢

將純化的可疑菌進行革蘭染色。小腸結腸炎耶爾森氏菌呈革蘭氏陰性球桿菌,有時呈橢圓或桿狀,大小為(0.8μm～3.0μm)×0.81μm

5.7 生化鑒定

5.7.1 從5.5中的營養(yǎng)瓊脂平板上挑取單個菌落接種生化反應管,生化反應在26℃士1℃進行。小腸結腸炎耶爾森氏菌的主要生化特征以及與其他相似菌的區(qū)別見表1。

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